巴马小型猪主要细胞因子的克隆及序列分析

为了丰富广西巴马小型猪细胞因子生物学数据,本试验采取广西巴马小型猪的外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR扩增,将克隆出的与目的基因大小相符的片段回收,再与T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆,将重组菌测序后提交NCBI,比较克隆序列与已知序列的同源性,并利用软件对克隆序列进行分析。结果表明,已克隆出的巴马小型猪细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α基因序列长度分别为338、377、380、402 bp,测序结果均与目的基因预期估计值吻合。序列分析结果发现与已知的家猪或野猪的相应基因同源性较高,IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α序列同源性分别为98.9%、99.5%、99.2%、100%。研究巴马小型猪细胞因子基因序列不仅丰富了生物学数据,而且为细胞因子的功能研究提供了依据,也为细胞因子的定量检测奠定了基础。     

深度旅游视角的巴马乡村养生旅游业竞争力提升路径

分析了巴马乡村养生旅游的特征,突出其长寿文化的垄断性、旅游资源的多样性、人与自然的和谐性,指出巴马乡村养生旅游加快新农村建设的步伐主要在于：实现家门口就业,增加农民收入;完善农村基础设施建设;改善农村卫生状况,逐步转变村民观念;促进农村产业结构调整;建立长寿老人保护机制。综合考察了巴马乡村旅游的发展现状,总结了制约巴马乡村旅游发展的瓶颈,即长寿区域环境遭受污染,开发无序、缺乏管理,基础设施亟待改善。在此基础上提出了巴马乡村养生旅游竞争力提升的路径,强调应加强长寿旅游资源的保护,打造农家旅馆示范基地并执行准入制度,建立社区医疗体系,以有利于巴马乡村旅游实现经济效益、社会效益和生态效益的同步提升,进而彰显其旺盛的生命力。     

不同体重环江香猪胎儿的羊水和尿囊液化学成分分析

 【目的】确定环江香猪妊娠早期胎儿体重与胎液生化参数的关系,为揭示宫内发育迟缓的发生机制及探寻其防治方法提供参考。【方法】选取体重35—40 kg的雌性环江香猪,7头,单栏饲养,每栏1头。配种第45天,颈动脉放血处死并解剖,分别称取胎儿、胎盘和子宫的重量;对每头母猪各选取2只体重最大和最小的胎儿,采集与胎儿对应的母猪羊水、尿囊液和胎盘,-20℃保存备用。【结果】与体重最大胎儿相比,体重最小胎儿的体重及母体胎盘重、子宫重和羊水+尿囊液体积分别低23%、62%、41%和39%（P＜0.05）,羊水总胆固醇浓度高30%（P＜0.05）,尿囊液丝氨酸、丙氨酸和酪氨酸浓度分别低58%、44%和29%（P＜0.05）,而赖氨酸、精氨酸和苏氨酸浓度分别高25%、40%和114%（P＜0.05）;胎盘总蛋白质含量和诱导型一氧化氮合酶的活性分别高39%和70%（P＜0.05）,结构型一氧化氮合酶的活性低22%（P＜0.05）。【结论】妊娠早期胎儿体重大小与部分生化参数密切相关。     

广西巴马小型猪成纤维细胞体外培养体系的建立

为建立广西巴马小型猪腹部成纤维细胞、耳成纤维细胞、睾丸成纤维细胞、肺部成纤维细胞及脾成纤维细胞体外培养体系,以新生巴马小型猪为试验材料,使用微量液体组织块贴壁法原代培养分离几种成纤维细胞,进行常规传代培养、冷冻和复苏;根据细胞的形态、生长特性等观察其体外生长能力和增殖寿命.结果显示,广西巴马小型猪腹部成纤维细胞、耳成纤维细胞、睾丸成纤维细胞、肺部成纤维细胞及脾成纤维细胞获得成功分离,体外可以传代和冷冻;冷冻复苏后仍可以正常培养和传代;腹部成纤维细胞免疫荧光检测结果显示波形蛋白表达阳性,角形蛋白表达阴性.研究成果可为显微操作核移植、手工核移植和转基因相关操作等提供不同类型的供体材料.     

广西巴马小型猪脂联素受体1和受体2 cDNA的克隆及序列分析

该试验根据GenBank中普通猪脂联素受体（AdipoR）mRNA序列,利用RT—PCR法对广西巴马小型猪AdipoR基因进行克隆,与NCBI中发表的猪AdipoR序列进行同源性比较,分析广西巴马小型猪AdipoR的cDNA及氨基酸序列结构特点,为进一步从分子水平上对广西巴马小型猪的生长发育提供理论依据,也为日后构建真核表达载体,研究AdipoR基因的生物功能奠定基础。     

类猪圆环病毒因子P1感染对猪红细胞的影响

探讨类猪圆环病毒因子P1感染后,广西巴马小型猪发生贫血的类型,推断贫血发生的原因。12头30日龄的猪随机分成两组,每组6头,试验组经腹股沟淋巴结途径接种P1分子克隆。采用自动血液分析仪对接种后3d、8d、17d、24d、31d及40d猪的外周血进行红细胞各参数检测。统计分析结果显示P1感染后,与对照组相比,红细胞参数之间无差异的指标有RBC、HGB、HCT、MCV和MCHC等5项,而MCH在接种后17d明显降低,而RDW在31d增高明显。可见,猪感染类猪圆环病毒因子P1可导致小细胞低血色素性贫血。     

低温压榨火麻仁油的工艺与品质研究

通过低温液压压榨技术研究火麻仁油脂的提取工艺。首先对火麻仁原料进行筛选,然后通过单因素实验研究压榨的时间、温度、压力以及投料量对火麻仁出油率的影响,采用正交实验对液压压榨火麻仁油的工艺进行优化,并对火麻仁油进行质量评价。结果表明,广西巴马产的去壳火麻仁原料含油率高达56.53%,且以液压压榨出油率最高,其压榨油脂品质最佳。液压法压榨火麻仁油的最佳工艺为:投料量500 g,压榨压力50 MPa,压榨温度70℃,在此最佳条件下火麻仁油的出油率为44.01%。经检测,所得的火麻仁油含有大量的不饱和脂肪酸,感官指标和理化指标均符合食用植物油标准。     

基于高脂饲料饲喂及球囊拉伤技术的小型猪颈总动脉粥样硬化模型构建

为了研究人类动脉粥样硬化性疾病及其发病机制,采用高脂饲料饲喂合并球囊拉伤的方法,模拟人类自然发病过程,建立小型猪颈总动脉粥样硬化动物模型。实验结果显示:饲喂高脂饲料后第30天造模,动物存活率100%,随时间的增加体重逐渐升高;与基础值相比,血液中甘油三酯(TG)含量变化不显著,总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量变化显著(P!0.05);饲喂高脂饲料后第120天,与基础值相比,总胆固醇含量升至其5.6倍,低密度脂蛋白含量升至其8.4倍,高密度脂蛋白含量升至其4.4倍;动脉粥样硬化指数(AI值)均大于4;病理学观察显示血管损伤部位管腔狭窄,病变符合动脉粥样硬化的基本特征。上述结果表明,在本实验条件下,可以在4个月内成功复制小型猪动脉粥样硬化(As)模型,与其他现有的As动物模型相比,具有成模时间短,方法简便易行的特点。     

广西巴马小型猪内源性反转录病毒进化年代分析

【目的】确定广西巴马小型猪内源性反转录病毒（PERV-BM）的进化年代。【方法】对先前扩增、测序获得的 9个PERV-BM的LTRs,一个PERV-BM全长基因组序列,登录号为HM159246及GenBank上发表的所有背景清楚的猪内源性反转录病毒（PERV）的LTRs及env序列进行分析。首先利用DAMBE软件对上述序列比对分析,合并同源性较高的,筛选有差异代表性的核酸序列的数据集。然后利用MEGA5.2软件Neighbor-Joining方法计算PERV-BM遗传进化关系。利用DAMBE软件对上述筛选的序列集进行替换饱和度计算,分析核酸进化速率的稳定性;利用MEGA5.2软件,通过最大相似法对筛选数据制作的遗传进化树进行分子钟行为分析。最后对广西封闭群内的广西巴马小型猪3′-LTR序列进行替代饱和度及分子钟分析,对符合分子钟行为的LTRs序列,以假设的恒定进化速率计算PERV-BM的进化年代。【结果】经过DAMBE软件分析后,选出80多个GenBank上发表的有代表性的env、LTRs序列数据集。对PERV-BM (HM159246) 序列全长遗传进化分析显示,PERV-BM与中国的PERV核酸序列EF133960和GU980187,荷兰的AF356697亲缘关系较近,与韩国的HQ540595和美国的AF038600和NC_003059亲缘关系则较远。利用DAMBE软件对筛选数据集替换饱和度检测结果显示,S和V值随PERV序列之间进化分歧的增加呈线性的增加。LTRs序列数据集替换饱和曲线呈线性关系,没有替换饱和现象发生,LTRs的进化随时间持续且稳定。数据集env序列替换饱和曲线不完全呈线性关系,表明env序列集进化速率不稳定。利用MEGA5.2的最大相似法对LTRs和env数据集的进化树进行分子钟行为检测结果显示,LTRs序列集接受分子钟假说,env进化不符合分子钟行为,这和不饱和度检测的结果一致。因此可用LTRs进化的近分子钟行为进行PERV进化年代的计算。利用DAMBE软件对广西封闭群内的广西巴马小型猪3′-LTR序列进行替代饱和度及分子钟分析结果显示,3′-LTR的进化符合分子钟行为可用于进化年代计算。假设以灵长类ERV的积累突变率,每个核苷酸每年的替换率2.3×10^-9-5.0×10^-9,计算PERV-BM约进化于3.3×10⁶-7.1×10⁶年前。【结论】PERV-BM进化年代与欧洲小型猪PERV进化时间7.6×10⁶年前相近。     

巴马县47年气温和降水变化特征分析

利用统计分析方法对巴马气象站1960-2006年共47年的温度和降水资料进行统计。分析47年来巴马温度及降水的变化特征及趋势,分析结果表明：巴马县47年来,年平均气温以0.14℃/10年的趋势变暖,进入21世纪,巴马县年平均降水量总趋势以15.7mm/年的变化率减少。